ביוכימיה מעבדה (0455.2665)

שם הקורס באנגלית: Biochemistry - Laboratory

 

מרצה הקורס: פרופ' עאזם עבדסלאם

 

ימים ושעות הקורס

סוג: שיעור
מספר קורס סמסטר יום משעה עד שעה בניין חדר
0455.2665.01 ב א 09:00 10:00 שרמן 105
 
סוג: מעבדה
מספר קורס סמסטר יום משעה עד שעה בניין חדר
0455.2665.02 ב א 14:00 20:00 שרמן 108
0455.2665.03 ב ב 14:00 20:00 שרמן 108

 

סילבוס:

 

בקורס מתקיימות  6 מעבדות

מעבדה 1

קינטיקה אנזימטית, פגישה אחתButyryl choline esterase  כמודל ללימוד קינטיקה אנזימטית:
 1) קביעה של קבוע מיכלאיס-מנטן Km ושל המהירות המירבית Vmax על ידי שימוש בנתונים מגרף רציפקוקאלי לפי Lineweaver Burke
2) אפיון עיכוב תחרותי של האנזים ע”י הסם ההלוצינוגני phencyclidine וקביעה של קבוע העיכוב Ki
3)  רכישת נסיון בשימוש ב-microplate reader, ספקטרופוטומטר המאפשר מדידה בו זמנית של 96 ריאקציות.
 

================================

 

מעבדה 2+ מעבדה 3

הפרדת חלבונים מתערובת ואפיונם, שתי פגישות
הפרדת ליזוזים ואובומוקואיד מתערובת ע”י כרומטוגרפיה של החלפת יונים 
1)  . קביעת הפעילות האנזימטית של ליזוזים
2)   עיכוב של פעילות האנזים הפרוטאוליטי טריפסין על ידי אובומוקואיד מחלבון ביצה
3)   קביעת המסה המולקולרית של חלבונים על ידי אלקטרופורזה בגל פוליאקרילאמיד בנוכחות דטרגנט בתנאים דנטורטיבים
Polyacrylamide gel electrophoresis, PAGE
4)  הקניית המושגים יחידת פעילות אנזימטית, פעילות ספציפית, דרגת נקוי, ניצולת.
5)   לימוד המעלות והחסרונות של שיטות שונות לקביעת ריכוז חלבון.
 ==========================

מעבדה 4

אינדוקציה של גן זר Transgene, פגישה אחת
ערור הביטוי של גן המקודד לאנזים gama-glutamyl transpeptidase מאדם, הנמצא תחת בקרה של הפרומוטר ל- metallothioneine מכבש, שהוכנס לתאי עכבר.
1)   אינדוקציה של הטראנסגן ע”י אבץ.
2)   קביעת הפעילות הספציפית של האנזים כפונקציה של ריכוז המשרן
3)  קביעת מיקום האנזים בממברנת התא.
4) זיהוי האנזים בחתכי כלית עכבר בגל ע”י צביעה היסטוכימית המבוססת על הפעילות האנזימטית.

 

================================

 

מעבדה 5

שיעתוק, פגישה אחת
יצירת RNA על תבנית של DNA ואפיון תוצרי השעתוק
1)  שיעתוק סימולטני של שני רצפי DNA הנשלטים כל אחד על ידי פרומוטר ייחודי, על ידי T3 RNA polymerase 
ו-T7 RNA polymerase 
2)   בידוד תוצרי השיעתוק ואפיונם לפי אורכם ע”י אלקטרופורזה בגל אגארוז. 
3)  אפיון תוצרי השיעתוק על ידי היברידיזציה עם אוליגונוקלאוטידים סינתטים מסומנים בביוטין [Northern blot] , וגילוי חומצות גרעין בשיטת Enhanced Chemiluminescence,
4)   גילוי, זיהוי ואפיון של DNA ותוצרי השיעתוק שלו בג’ל על ידי שימוש בגלאים פלורסצנטים הבולעים אור אינפרא אדום 
IRdyes, Odissey infrared imager
 

================================

מעבדה 6

ביוסינתזה של שומנים , פגישה אחת
שימוש בחומר רדיואקטיבי [חומצת חומץ מסומנת ב-14 [C במעקב אחרי מסלול מטבולי
1)   יצירה של חומצות שומן ע”י אנזימים מסיסים מכבד חולדה
2)   אינקורפורציה של חומצות שומן לגליצרידים ופוספוליפידים ע”י אנזימים ממברנאלים מכבד חולדה.
3)   זיהוי וקביעה כמותית של תוצרי המסלול הביוסינתטי ע”י כרומוטוגרפיה ברבדים דקים.
4)   שימוש במונה קרינת beta ובפוספוראימאג’ר
ו-phosphorimager.
5)  עיכוב ביוסינתזה של ליפידים ע’’י DHEA, הורמון מונע השמנה.
6)   הקניית כללי בטיחות והרגלי עבודה בשימוש בחמר רדיואקטיבי.

הקורס ייתקיים במחצית השניה של הסמסטר.

בתחילת כל שבוע יתקיים שיעור פרונטאלי כהקדמה למעבדה של אותו שבוע. הנוכחות חובה.

בקורס שש פגישות בלבד. הכנת המעבדות מסובכת ויקרה. לפיכך, הכלל של עזיבת הקורס בשבועיים הראשונים של הסמסטר אינו חל על הקורס הזה.

חיסורים, למעט אלה הנובעים ממחלה או מילואים, יפגעו בציון הסופי.
התאריכים בהם תתקיים המעבדה לביוכימיה יפורסמו בתחילת השנה:


** הערה: תוכן הקורס ניתן לשינוי. במידה ויחולו שינויים, הם ייפורסמו באתר הקורס הכי מאוחר שבוע לפני תחילת הקורס.

מטרות המעבדה:
הקניית מושגי יסוד, ידע ומיומנות בעבודה כמותית במעבדה ביולוגית.

 
 
 
 
התאריכים בהם תתקיים המעבדה לביוכימיה הם:

מעבדה 1:
מעבדה 2:
מעבדה 2:
מעבדה 3 :
מעבדה 4 :
מעבדה 5:


** הערה: תוכן הקורס ניתן לשינוי. במידה ויחולו שינויים, הם ייפורסמו באתר הקורס הכי מאוחר שבוע לפני תחילת הקורס.

מטרות המעבדה:
הקניית מושגי יסוד, ידע ומיומנות בעבודה כמותית במעבדה ביולוגית.
 
 
דרישות קדם: הקורס ביוכימיה אנזימולוגיה ומטבוליזם או קורס מקביל לו.
 
נוכחות חובה  (בהרצאה ובמעבדה)
 
הרכב ציון: 
דוחות מעבדה 50%
הערכת מדריך 30%
בחן סופי : 20% (יתקיימו 6 בחנים קצרים בתחילת כל מעבדה)
 
 
ספרות:
ספרי ביוכימיה בספריה: הדפים הרלוונטים מצוינים בחוברת המעבדה.
אוניברסיטת תל-אביב, ת.ד. 39040, תל-אביב 6997801
UI/UX Basch_Interactive